Determination of the stability of T-lymphocytes with time and temperature variables through flow cytometry in the Synlab 2021 laboratory

Abstract

Introduction: quantification of T-lymphocyte subsets is routinely performed in patients with acquired immunodeficiency syndrome (HIV) by flow cytometry, in order to stage infection and response to antiretroviral therapy. Although some commercial houses suggest processing the samples in a period of 48 hours at 20-25 °C, there is no consensus about the conditions of time and temperature in which the T lymphocytes are not affected. Materials and methods: fifty whole blood samples with EDTA anticoagulant from the Medellin metropolitan area were evaluated. Each one was exposed under conditions of temperature and storage time before processing. Time points included < 12 hours (initial sample), 24, 48, 72, 96 and 120 hours. And at room temperature (20-25 °C) and refrigeration (4-8 °C). Results: variables such as temperature and time influence the counts of the different lymphocyte subpopulations; the effects of ambient temperature on the count and other variables are more critical than the passage of time. CD4 expression was the most stable marker; For each day that was evaluated, it was reduced by 0.08 cells/μl and it was not statistically significant (95% CI: 0.10-0.01; p = 0.104). The CD45 marker presented a greater reduction in the absolute count. Over the days, on average, 0.53 cells/μl decreased, a fact that was statistically significant (95% CI: -0.97- 0.09; p = 0.016). Regarding the viability evaluated in total lymphocytes, it remained high at a temperature of 4-8 °C for 96 hours, with a median of 72.7% Introducción Los linfocitos Τ son un grupo heterogéneo de células específicas para el reconocimiento de antígenos(1). Dado su papel determinante en el establecimiento de las respuestas adaptativas de la respuesta inmune, su recuento es de gran importancia en enfermedades que se caracterizan por alteraciones en su número y frecuencia, como en el síndrome de inmunodeficienciaadquirida (VIH). Con la citometría de flujo (CMF) se estima el número de células CD4, parámetro crítico útil para estadificar la infección y guiar la toma de decisiones en cuanto a la conducta clínica a seguir(2). Uno de los puntos críticos de la fase preanalítica de la CMF es el tiempo que transcurre desde la toma de la muestra hasta su procesamiento y la temperatura a la que esté expuesta, debido a que las muestras se remiten a laboratorios de referencia desde otros lugares(3). La casa comercial recomienda realizar la tinción de las muestras en un plazo de 48 horas(4), mientras que otros proveedores aconsejan analizar las muestras a las 24 horas(5), autores como Glencross, et al.(6) indican que utilizar estrategias de análisis citométrico, como el “panleucogating”, facilita la medición precisa de CD4, incluso después de la pérdida de las propiedades de dispersión directa, hasta cinco días luego de flebotomía. La pérdida de estabilidad se traduce en cambios de expresión de los marcadores, lo cual ocasiona alteraciones en los resultados que pueden conducir a imprecisiones o fallos en las decisiones clínicas(7). Por lo anterior, el objetivo de este trabajo fue evaluar la estabilidad de los linfocitos T CD45, CD3, CD4 y CD8 en diferentes condiciones de temperatura y tiempo.